CRISPRの次なる地平：健康、長寿、そして未来の倫理的ジレンマ

CRISPRの次なる地平：健康、長寿、そして未来の倫理的ジレンマ

2023年、遺伝子編集技術CRISPR-Cas9を用いた臨床試験における顕著な成果が報告され、遺伝性疾患に対する新たな治療法の可能性が現実のものとなりつつあります。この画期的な技術は、単に病気を治すだけでなく、人間の健康寿命を延伸し、さらには「老化」という生命現象そのものに介入するという、SFのような領域へとその応用範囲を広げ始めています。しかし、この強力なツールは、これまで人類が直面したことのないような深い倫理的、社会的な問いを投げかけています。TodayNews.proは、CRISPRの最前線を取材し、その驚異的な可能性と、我々が向き合わなければならない複雑な課題を深く掘り下げます。

CRISPR-Cas9技術は、2012年の発見以来、生命科学のあり方を根底から変えつつあります。その精確性、効率性、そして比較的容易な操作性から、基礎研究から臨床応用、さらには農業や環境分野まで、あらゆる領域で革新をもたらしています。遺伝子レベルでの「編集」を可能にするこの技術は、かつては不可能とされていた疾患の根本治療や、老化という避けられないプロセスへの介入といった、人類の根源的な願望に応える可能性を秘めているのです。しかし、その強力な力は、我々に重大な責任と、これまで以上に深い倫理的、社会的な熟考を求めています。遺伝子を操作することが、人間の定義、社会の公平性、そして生命の未来にどのような影響を与えるのか、TodayNews.proは専門家の意見や最新の研究動向を交えながら、この複雑なテーマを多角的に探求します。

CRISPR-Cas9の革命：遺伝子編集技術の進化

CRISPR（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）-Cas9システムは、微生物がウイルスのDNAを排除するために進化させた自然の防御機構に由来する遺伝子編集技術です。このシステムは、標的となるDNA配列を正確に認識し、切断する能力を持つため、科学者たちはこの「遺伝子のはさみ」を利用して、ゲノム上の特定の遺伝子を編集できるようになりました。

CRISPR-Cas9の基本原理

CRISPR-Cas9は、大きく分けて二つの主要なコンポーネントから構成されています。一つは「Cas9」と呼ばれる酵素で、DNAを切断する「はさみ」の役割を担います。もう一つは「ガイドRNA（gRNA）」と呼ばれる分子で、Cas9酵素をゲノム上の標的配列へと正確に導くための「案内役」です。gRNAは、編集したいDNA配列に相補的な配列を持つため、Cas9はgRNAに導かれて標的DNAに結合し、その箇所でDNAを切断します。この切断されたDNAは、細胞自身の修復機構によって再結合されますが、この過程で遺伝子を不活化させたり、新たなDNA配列を挿入したりすることが可能です。

Cas9酵素によるDNA切断後、細胞は「非相同末端結合（NHEJ）」または「相同組換え修復（HR）」という二つの主要なDNA修復経路を用いて切断部位を修復します。NHEJ経路は、エラーを起こしやすく、しばしば微細な挿入や欠失（インデル）が生じます。このインデルが遺伝子内に生じると、タンパク質の読み枠がずれて機能不全に陥り、結果として遺伝子を不活化させる（ノックアウトする）ことができます。一方、HR経路は、テンプレートDNA（通常は別途導入する）を参照して正確に修復するため、このテンプレートに目的の配列を組み込んでおくことで、遺伝子に特定の塩基置換を導入したり、新たな遺伝子配列を挿入したりすることが可能になります（ノックイン）。

技術の進化と改良

CRISPR-Cas9は、その発見以来、急速な進化を遂げてきました。初期のシステムは、オフターゲット効果、つまり標的以外のDNA配列を誤って切断してしまうリスクが懸念されていました。このオフターゲット効果は、予期せぬ遺伝子変異を引き起こし、がん化などの深刻な副作用につながる可能性がありました。しかし、その後の研究により、より高精度で特異性の高いCas9変異体（例：high-fidelity Cas9）が開発され、オフターゲット効果を大幅に低減することが可能になりました。また、Cas12a（Cpf1）のような、Cas9とは異なるDNA認識・切断機構を持つ代替酵素も登場し、応用範囲を広げています。Cas12aは、Cas9よりも長いPAM（Protospacer Adjacent Motif）配列を必要とするため、標的配列の選択肢が広がり、また、DNAを切断した後に「末端接着」という自己切断能を持つため、より洗練された遺伝子編集が可能になる場合もあります。

さらに画期的なのが、DNAを切断せずに特定の塩基を直接書き換える「塩基編集（Base Editing）」や、DNAを切断する回数を減らし、より柔軟な編集を可能にする「プライム編集（Prime Editing）」といった技術の開発です。塩基編集は、Cas9とDNAを結合させるガイドRNAに、DNAの塩基を化学的に変換する「デアミナーゼ」などの酵素を融合させたもので、DNAを切断せずに特定の塩基（例：A-TペアをG-Cペアに、またはC-GペアをT-Aペアに）を直接置換できます。これにより、インデルの発生をほぼ完全に排除し、より安全で精密な遺伝子編集が可能になります。プライム編集は、Cas9と逆転写酵素を組み合わせたもので、ゲノム上の標的箇所でDNAを切断することなく、RNAテンプレートをガイドとしてDNA配列を書き換えることができます。これにより、塩基置換だけでなく、特定の塩基の挿入や欠失も、より柔軟かつ正確に行えるようになり、これまでCRISPR-Cas9では困難だった多くの遺伝子変異の修復に応用できる可能性が広がっています。

CRISPR技術の応用分野の広がり

CRISPR技術の応用は、基礎生物学研究にとどまらず、医学、農業、環境科学など、多岐にわたる分野で進められています。基礎研究では、特定の遺伝子の機能を調べるためのノックアウトマウスやノックインマウスの作製が容易になり、生命現象の解明に大きく貢献しています。例えば、ある遺伝子の機能を失わせる（ノックアウトする）ことで、その遺伝子がどのような役割を果たしているのかを明らかにしたり、逆に、特定の遺伝子を導入・改変（ノックイン）することで、その遺伝子を導入した際の細胞や生物の変化を観察したりすることが、迅速かつ効率的に行えるようになりました。これにより、疾患モデルの作成や、薬剤開発のスクリーニングなどが加速されています。

農業分野では、病害虫に強く、干ばつや塩分にも耐性のある、栄養価の高い作物の開発が進められています。例えば、遺伝子編集によって、作物が病原菌に感染しにくくなるようにしたり、収穫量を増加させたり、あるいは保存期間を長くしたりする研究が行われています。これにより、食糧問題の解決や、持続可能な農業の実現に貢献することが期待されています。環境科学では、外来種の駆除（例：遺伝子ドライブ技術を用いた駆除）や、汚染物質を分解する能力を持つ微生物の設計、さらには絶滅危惧種の保護など、生態系保全や環境再生への応用も検討されています。

健康への応用：遺伝性疾患の治療と予防

CRISPR技術の最も期待されている応用分野の一つが、遺伝性疾患の治療です。これまで有効な治療法がなかった多くの疾患に対して、根本的な治療をもたらす可能性を秘めています。

遺伝性疾患の治療への挑戦

鎌状赤血球症、ベータサラセミア、嚢胞性線維症、デュシェンヌ型筋ジストロフィーといった遺伝性疾患は、単一または複数の遺伝子の変異によって引き起こされます。これらの疾患は、患者のQOL（Quality of Life）を著しく低下させ、時には生命を脅かすものもあります。CRISPR-Cas9を用いることで、これらの疾患の原因となる変異遺伝子を正確に修正したり、機能不全に陥っている遺伝子を正常なものに置き換えたりすることが理論上可能になります。例えば、鎌状赤血球症では、ヘモグロビンβ鎖の遺伝子変異が原因であり、この変異をCRISPRで修復することや、あるいは胎児型ヘモグロビンの発現を促進する遺伝子を活性化させることで、症状の改善が期待されています。

遺伝性疾患の治療アプローチは、大きく分けて二つあります。一つは「in vivo（生体内）」アプローチで、編集ツールを直接患者の体内に投与し、標的の細胞で遺伝子編集を行います。もう一つは「ex vivo（生体外）」アプローチで、患者から採取した細胞（例：造血幹細胞）を体外でCRISPR-Cas9を用いて編集し、編集済みの細胞を再び患者の体内に戻します。現在、臨床試験で最も成果を上げているのは、後者のex vivoアプローチです。このアプローチは、編集プロセスをより精密に制御できるという利点があります。

臨床試験の進捗と初期の成果

現在、世界中でCRISPR-Cas9を用いた遺伝性疾患の治療を目指した臨床試験が数多く進行しています。特に、鎌状赤血球症やベータサラセミアに対する治療法では、患者自身の造血幹細胞から遺伝子を編集し、再び体内に戻す「ex vivo」アプローチが注目されています。2023年には、これらの疾患に対するCRISPR-Cas9を用いた遺伝子治療薬が、一部の国で条件付きで承認されたというニュースも報じられています。これは、遺伝子編集技術が臨床現場で実用化される画期的な一歩と言えるでしょう。一部の被験者では、治療後に輸血の必要がなくなったり、疾患による痛みが劇的に軽減したりするなど、驚異的な改善が見られています。例えば、ある臨床試験では、治療を受けた患者の約9割で、重篤な疼痛クリーゼ（鎌状赤血球症の代表的な合併症）の発生がゼロになったという報告もあります。

しかし、これらの初期の成果は、まだ一部の患者に限られたものです。治療は依然として高額であり、長期的な効果や安全性については、さらなる追跡調査が必要です。また、オフターゲット効果や、編集された細胞が長期的に安定して機能するかどうかなど、解決すべき課題も残されています。これらの課題を克服し、より多くの患者に安全で効果的な治療を提供するため、研究開発は精力的に続けられています。

予防医学への展望

遺伝子編集技術は、疾患の治療だけでなく、将来的な疾患の発症リスクを低減する「予防」の側面にも応用が期待されています。例えば、がんやアルツハイマー病、心血管疾患などの多因子疾患には、遺伝的な要因が関与していることが知られています。これらの疾患の発症リスクを高める遺伝的変異を、発症前に（例えば、胚の段階や、発症リスクの高い遺伝子を持つ成人において）修正することで、病気を未然に防ぐことができるかもしれません。これは、人類の健康増進に計り知れない貢献をもたらす可能性があります。

しかし、この予防医学への応用は、倫理的な観点から特に慎重な議論が求められます。例えば、まだ発症していない疾患のリスクを低減するために遺伝子を編集することが、どこまで許容されるべきか、という問題です。また、どのような遺伝的変異を「疾患リスク」とみなし、編集の対象とするかという基準設定も、社会的な合意形成が必要です。さらに、予防目的の遺伝子編集が、「デザイナーベビー」問題へとつながる可能性も懸念されており、技術の発展とともに、倫理的なガイドラインの整備が急務となっています。

長寿への探求：老化メカニズムの解明と介入

近年、CRISPR技術は、寿命の延伸、すなわち「長寿」という、人類が古来より抱いてきた願望にも新たな光を当てています。老化のメカニズムを遺伝子レベルで理解し、それを操作することで、健康寿命を延ばし、より長く健康的な人生を送るための可能性が探られています。

老化の遺伝的基盤

老化は、単一の原因によって引き起こされるものではなく、細胞のDNA損傷の蓄積、テロメアの短縮、ミトコンドリア機能の低下、エピジェネティックな変化、炎症の慢性化（インフラメーション）、細胞老化（セネッセンス）など、多岐にわたる要因が複雑に絡み合って進行する生命現象です。しかし、これらのメカニズムの根底には、遺伝子の働きやその変化が深く関わっています。例えば、DNA修復遺伝子の機能低下は、DNA損傷の蓄積を加速させ、老化を早める可能性があります。また、テロメアの短縮は、細胞分裂の回数に限界をもたらし、組織の老化を引き起こします。エピジェネティックな変化、すなわちDNA配列そのものは変わらずに遺伝子の働きが変化する現象も、老化に伴って蓄積することが知られています。

CRISPR技術を用いることで、これらの老化に関連する遺伝子を特定し、その機能を操作することが可能になりました。特定の遺伝子を操作することで、老化の進行を遅らせたり、老化に伴う機能低下（例：免疫機能の低下、代謝異常、筋力低下など）を回復させたりできる可能性が、酵母、線虫、ショウジョウバエ、マウスといったモデル生物を用いた研究で示唆されています。例えば、老化を促進する遺伝子をノックアウトしたり、逆に、細胞の寿命を制御する遺伝子（例：サーチュイン遺伝子ファミリー）の発現を促進したりすることで、モデル生物の寿命が有意に延伸することが報告されています。これらの研究は、老化が遺伝的に部分的に制御可能であることを示唆しており、ヒトの健康寿命延伸への期待を高めています。

長寿遺伝子とCRISPR

「長寿遺伝子」と呼ばれる、長寿と関連が深いとされる遺伝子群の研究も進んでいます。これらの遺伝子は、細胞のストレス耐性を高めたり、代謝を最適化したり、DNA修復機構を強化したりする働きを持つことが多いとされています。代表的な例として、サーチュイン遺伝子ファミリー（SIRT genes）が挙げられます。SIRT1、SIRT3などのサーチュイン遺伝子は、NAD+（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド）という補酵素を必要とし、細胞のエネルギー代謝、DNA修復、抗酸化作用、炎症抑制など、老化の抑制に深く関与していることが示唆されています。動物実験では、サーチュイン遺伝子の活性化が寿命延伸や、心血管疾患、神経変性疾患などの加齢関連疾患の予防につながる可能性が報告されています。

CRISPR技術は、これらの長寿遺伝子の働きを増強するために利用されています。例えば、サーチュイン遺伝子の発現を促進するような遺伝子領域にCRISPRを用いて変異を導入したり、あるいは、老化を促進する遺伝子（例：p16INK4a、p53など、細胞老化に関連する遺伝子）の働きを抑制したりすることで、老化のプロセスに介入する試みがなされています。また、テロメアを伸長させる酵素であるテロメラーゼの活性を調節する研究も行われています。テロメアの過度な短縮は細胞老化を引き起こしますが、テロメラーゼの活性化は細胞の分裂能力を維持し、組織の若返りにつながる可能性があります。しかし、テロメラーゼの過剰な活性化は、がん細胞の増殖を助長する可能性もあるため、その調節は非常に慎重に行われる必要があります。

健康寿命の延伸という目標

長寿研究の究極の目標は、単に寿命を延ばすことではなく、「健康寿命」を延伸することにあります。つまり、病気や介護に頼ることなく、自立した健康な生活を送れる期間を長くすることです。単に長生きするだけでは、その期間が苦痛に満ちたものであれば、それは必ずしも望ましい結果とは言えません。CRISPR技術は、老化に関連する疾患、例えば心血管疾患、神経変性疾患（アルツハイマー病、パーキンソン病など）、がん、糖尿病、骨粗鬆症といった、加齢とともに発症リスクが高まる疾患の根本原因にアプローチすることで、健康寿命の延伸に貢献できる可能性があります。

例えば、アルツハイマー病の原因とされるアミロイドβタンパク質の蓄積を抑制する遺伝子を編集したり、神経細胞の保護や再生を促進する遺伝子を活性化したりする研究が進められています。また、がんの発生に関わる遺伝子変異を修復したり、免疫細胞の抗がん能力を高めたりする応用も期待されています。これらの研究が成功すれば、単に平均寿命が延びるだけでなく、多くの人々がより長く、より活動的で、より幸福な人生を送ることができるようになるでしょう。しかし、これらの研究はまだ初期段階であり、ヒトへの応用には慎重な臨床試験と、安全性に関する十分な検証が必要です。

倫理的課題と社会的受容

CRISPR技術がもたらす驚異的な可能性は、同時に、人類がこれまで経験したことのないような倫理的、社会的な課題を提起しています。これらの課題に真摯に向き合い、社会全体で議論を深めていくことが不可欠です。

生殖細胞系列編集の是非

最も議論を呼んでいるのが、「生殖細胞系列編集」です。これは、精子、卵子、または受精卵といった、次世代に遺伝情報が引き継がれる生殖細胞系列の遺伝子を編集する技術です。生殖細胞系列編集によって行われた遺伝子改変は、その個人だけでなく、その子孫にも永続的に受け継がれます。これにより、遺伝性疾患を根本的に根絶できるという期待がある一方で、予期せぬ副作用が子孫に及ぶリスク、デザイナーベビー（遺伝子操作された子供）の誕生、そして遺伝的格差の拡大といった深刻な懸念が指摘されています。現在、多くの国で生殖細胞系列編集は法的に禁止または厳しく制限されています。その理由は、現時点では技術的な安全性（オフターゲット効果など）が十分に確立されていないこと、そして、人類の遺伝子プールに不可逆的な変化をもたらす可能性への懸念からです。

一部の研究者は、重篤な遺伝性疾患を根絶する目的であれば、生殖細胞系列編集も許容されるべきだと主張しています。しかし、そのような目的であっても、その境界線をどこに引くのか、誰がその判断を下すのか、といった問題が残ります。また、一度生殖細胞系列編集が許容されるようになると、それが「能力増強」などの非治療目的の編集へとエスカレートしていく可能性も否定できません。そのため、国際的な合意形成と、厳格な規制枠組みの構築が不可欠とされています。

遺伝的格差と「デザイナーベビー」問題

もし、CRISPR技術が、単に疾患治療のためだけでなく、知能、身体能力、外見などを「強化」するために利用されるようになれば、遺伝的格差が社会に生じ、分断を深める可能性があります。経済的に裕福な人々だけが、遺伝子編集による「最適化」を受けられるようになれば、それは新たな形の差別を生み出すことになりかねません。例えば、より高い知能や優れた運動能力を持つ子供を「デザイン」することが可能になれば、教育や就職の機会において、遺伝子編集を受けた者とそうでない者との間に、埋めがたい格差が生じる可能性があります。これは、社会の公平性を著しく損ない、既存の社会構造に深刻な歪みをもたらすでしょう。

この「デザイナーベビー」問題は、単なる技術的な問題ではなく、人間の尊厳、多様性、そして「人間らしさ」とは何かという根源的な問いを投げかけます。一部の特性を「望ましい」として選択する行為は、人間の多様性を否定し、遺伝子を商品化するような倫理的リスクを孕んでいます。このような状況を防ぐためには、技術の利用目的を明確に定め、非治療目的の遺伝子編集を厳しく制限する国際的な枠組みが必要です。

オフターゲット効果と長期的な安全性

CRISPR技術は日々進化していますが、依然としてオフターゲット効果（標的以外の場所のDNAを誤って編集してしまうこと）のリスクはゼロではありません。これらの予期せぬ編集が、がんなどの新たな疾患を引き起こす可能性も否定できません。特に、生殖細胞系列編集においては、その影響が世代を超えて及ぶため、長期的な安全性に関する十分な検証と、厳格な監視体制が求められます。例えば、ある患者にCRISPR治療を施した際に、意図しない遺伝子変異が引き起こされ、それが数十年後にがんとして発症する、といった事態が起こりうるかもしれません。

現在、研究者たちは、オフターゲット効果を検出・定量するための高感度な技術開発や、より正確な編集を可能にする新しいCRISPRシステム（例：base editing, prime editing）の開発に注力しています。しかし、たとえオフターゲット効果を最小限に抑えられたとしても、ヒトのゲノムは非常に複雑であり、すべての潜在的なリスクを完全に予測することは困難です。そのため、臨床応用においては、リスクとベネフィットを慎重に評価し、患者への十分な説明と同意を得ることが不可欠です。また、治療後の患者に対する長期的なフォローアップ体制の確立も重要となります。

社会的な受容と透明性のある議論

CRISPR技術が社会に受け入れられるためには、科学者、倫理学者、政策立案者、そして市民一人ひとりが、その可能性とリスクについて理解を深め、率直な議論を行うことが不可欠です。技術の進歩は目覚ましいものがありますが、その導入には、社会的なコンセンサス形成が伴わなければなりません。科学技術の進展は、しばしば一般市民にとって理解しにくい側面を持っています。そのため、科学者たちは、自身の研究成果や、それが社会に与えうる影響について、分かりやすく、かつ正確に伝える責任があります。また、一般市民も、専門的な情報にアクセスし、主体的に学習する意欲を持つことが重要です。

透明性のある情報公開と、開かれた対話の場が求められています。政府や研究機関は、CRISPR技術に関する研究開発の進捗状況、臨床試験の結果、そして倫理的な検討事項などを、積極的に公開する必要があります。また、公開討論会、シンポジウム、メディアを通じた情報発信など、多様なチャネルを通じて、市民が意見を表明し、議論に参加できる機会を設けることが重要です。このようなプロセスを通じて、社会全体でCRISPR技術のあり方について合意を形成していくことが、技術の健全な発展につながります。

未来への展望：CRISPRが描く健康と生命の未来図

CRISPR-Cas9技術は、まだ発展途上にありますが、そのポテンシャルは計り知れません。今後、この技術は、私たちの健康、寿命、そして生命観そのものに profound な変化をもたらす可能性があります。

個別化医療の実現

CRISPR技術は、患者一人ひとりの遺伝的背景に合わせた、真の「個別化医療」の実現を加速させるでしょう。現代医療は、疾患の診断と治療において、個々の患者の状態を考慮する個別化アプローチへとシフトしています。CRISPR技術は、疾患の原因となる遺伝子変異を迅速かつ正確に特定し、それをピンポイントで修正する治療法を提供することで、従来の画一的な医療では到達できなかったレベルの治療効果をもたらす可能性があります。例えば、同じ疾患であっても、患者によって原因となる遺伝子変異が異なる場合があります。CRISPRを用いることで、その患者固有の変異のみを標的とした、オーダーメイドの遺伝子治療が可能になります。

これにより、治療効果の向上だけでなく、副作用の低減も期待できます。また、遺伝子編集技術は、個々の遺伝的リスクに基づいた疾患の早期発見や、予後予測にも貢献する可能性があります。個別化医療の進展は、医療の効率性と質を飛躍的に向上させ、患者一人ひとりが、その人にとって最も効果的で安全な医療を受けられる社会の実現を目指します。

難病治療のブレークスルー

これまで有効な治療法がなかった多くの難病、特に遺伝性疾患に対して、CRISPR技術は救世主となるかもしれません。現在、数千種類もの遺伝性疾患が存在し、その多くは根本的な治療法が確立されていません。CRISPR技術は、これらの疾患の根源にある遺伝子異常を修正する可能性を秘めています。臨床試験の成功事例が増えるにつれて、これまで絶望視されていた疾患が、治療可能なものへと変わっていく未来が現実味を帯びてきます。例えば、神経変性疾患、遺伝性免疫不全症、先天性代謝異常症など、これまで治療が困難であった疾患への応用が期待されています。

また、CRISPR技術は、感染症に対する新たな治療法や予防法の開発にも貢献する可能性があります。例えば、HIVウイルスをゲノムから排除する研究や、薬剤耐性菌に対抗する新しい抗生物質の開発などが進められています。これらのブレークスルーは、人類の健康を脅かす様々な疾患に対して、新たな希望をもたらすでしょう。

生命倫理と技術の調和

CRISPR技術の進歩は、私たちの社会に倫理的な問いを突きつけますが、それは同時に、生命とは何か、人間とは何かという根源的な問いに向き合う機会でもあります。技術の進歩と、人間が大切にすべき価値観との調和を図りながら、この強力なツールを賢く活用していくことが、未来への鍵となるでしょう。私たちが直面する倫理的な課題は、技術そのものの問題というよりは、その技術をどのように社会に適用していくか、という人間側の選択の問題です。生命の操作という行為の是非、人間の定義、そして社会における公平性や多様性のあり方について、私たちは深く考察し、共有された価値観に基づいて、責任ある意思決定を行っていく必要があります。

技術の進化は止まりませんが、その進歩が、人類全体の幸福と持続可能な社会の実現に貢献する形で進むように、国際的な協力、透明性のある議論、そして倫理的なガイドラインの遵守が不可欠です。CRISPR技術は、我々に大きな可能性をもたらしましたが、その未来は、私たち自身の賢明な選択にかかっています。

CRISPR技術の未来は、希望に満ちていると同時に、慎重な歩みが求められます。人類の叡智を結集し、この画期的な技術が、すべての人の健康と幸福に貢献する形で発展していくことを願ってやみません。科学、倫理、社会が協調し、この強力なツールを、人類の進歩のために最善の方法で活用していくことが、私たちの責務です。

参考文献・参考情報:

• New England Journal of Medicine - CRISPR-Cas9 for Sickle Cell Disease
• Wikipedia - CRISPR
• Reuters - CRISPR gene editing advances bring new hope for genetic diseases
• Nature - CRISPR gene editing: what’s next for the revolutionary technology
• Cell - CRISPR-based therapies: the past, present, and future